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細胞操作流程復蘇1.將恒溫水浴鍋中的水預熱到37℃;2.從液氮罐中取出要復蘇的細胞,盡快轉(zhuǎn)入恒溫水浴鍋中復溫,不斷震蕩凍存管以提高復溫速率;將融化了的凍存管中的用移液管轉(zhuǎn)入一直裝有5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中,充分混勻后,300g離心5min;3.離心完成后棄去上清,用1ml*培養(yǎng)基重懸細胞后,轉(zhuǎn)入T-25細胞培養(yǎng)中,再加*培養(yǎng)基4ml,之后轉(zhuǎn)入CO2培...
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轉(zhuǎn)染(Transfection)是指將DNA或者RNA導入真核細胞中的過程。轉(zhuǎn)染的目的是產(chǎn)生重組蛋白,或特異性增強或抑制轉(zhuǎn)染細胞中的基因表達。細胞轉(zhuǎn)染有哪些類型和方法呢?1)根據(jù)導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,可以分為瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)。瞬轉(zhuǎn)穩(wěn)轉(zhuǎn)導入的DNA沒有整合到基因組中,而是保留在細胞核上導入的DNA整合到基因組中導入的遺傳物質(zhì)不傳遞到子代;遺傳改變只是暫...
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細胞培養(yǎng)基的構(gòu)成中動物血清對細胞的生長繁殖起著重要作用。在動物血清中牛血清的應用又是zui廣泛的,所以想要細胞在培養(yǎng)過程中長的好、穩(wěn)定,牛血清的質(zhì)量好壞直接影響生物研究的質(zhì)量和安全性,使用質(zhì)量好的牛血清也是細胞培養(yǎng)中的重要環(huán)節(jié)。血清是提供生長激素、營養(yǎng)物,以及低分子營養(yǎng)物;提供結(jié)合蛋白;能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力;是細胞貼壁、鋪展生長所需因子的來源;起...
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養(yǎng)細胞可謂是個精細活,從事養(yǎng)細胞的人都知道養(yǎng)細胞的時候一旦不注意,就很容易造成細胞污染,所以想要養(yǎng)好細胞除了小心謹慎以外,還要提前做好準備:細胞培養(yǎng)前的準備1)在帶上手套開始細胞培養(yǎng)之前,先檢查一下移液管和瓶子的數(shù)量是否充足,以免在開始實驗后再次出入操作臺,這樣可以降低細胞污染的風險。2)細胞培養(yǎng)基也應先預熱,選擇只預熱部分培養(yǎng)基而非整瓶加熱,不但可以節(jié)約實...
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在制作原代細胞免疫熒光時,容易出現(xiàn)一些問題,造成熒光鑒定失敗,將抗原或抗體標記上熒光素,制成熒光抗體檢測組織或細胞內(nèi)的相應抗原(或抗體)時,一定要注意抗體的比例高低和濃度。制作免疫熒光常用的方法有:方法一:直接法步驟:將熒光標記的特異性抗體(抗原)直接加在抗原(抗體)上,經(jīng)一定的溫度和時間染色,水洗—干燥—封片—鏡檢優(yōu)點:操作簡便、特異性高、非特異性染色少缺...
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